如何利用液氮将菌种在-80℃低温冷冻保藏

将菌种保藏在-80 ℃冰箱中以减缓细胞的生理活动进行冷冻的一种保藏方法。 自增压液氮罐厂家分享其操作步骤如下：

*先做好安瓿管的准备

安瓿管材料以中性玻璃为宜。清洗安瓿管时，先用2%盐酸浸泡过夜，自来水冲洗干净后，用蒸馏水浸泡至pH中性，干燥后、贴上标签，标上菌号及时间，加入脱脂棉塞后，121 ℃下高压灭菌(15～20) min，备用。

如何利用液氮将菌种在-80℃低温冷冻保藏

其次要做好保护剂的选择和准备

保护剂种类要根据微生物类别选择。配制保护剂时，应注意其浓度及pH值，以及灭菌方法。如血清，可用过滤灭菌;牛奶要先脱脂，用离心方法去除上层油脂，一般在100 ℃间歇煮沸2～3次，每次(10～30) min，备用。

之后注重微生物保藏物的准备

在*适宜的培养条件下将细胞培养至静止期或成熟期，进行纯度检查后与保护剂混合均匀，分装。微生物培养物浓度以细胞或孢子不少于(108-1010)个/mL为宜(以大肠杆菌(Escherichia coli)为例，为了取得每毫升1010个活细胞菌液2 mL～2.5 mL，只需10 mL琼脂斜面两支)。 自增压液氮罐

采用较长的毛细滴管，直接滴入安瓿管底部，注意不要溅污上部管壁，每管分装量约(0.1～0.2) mL，若是球形安瓿管，装量为半个球部。若是液体培养的微生物，应离心去除培养基，然后将培养物与保护剂混匀，再分装于安瓿管中。分装安瓿管时间尽量要短，*好在(1～2) mL内分装完毕并预冻。分装时应注意在无菌条件下操作。

接着进行冻结保藏

将安瓿管或塑料冻存管置于-80 ℃环境中保藏。

*后，咱们还得知道，冷藏后如果要取出使用的复苏方法。从冰箱中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置38 ℃～40 ℃水浴中快速复苏并适当快速摇动。直到内部结冰全部溶解为止，约需50 s～100 s。开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养。 自增压液氮罐